样本类型：外周静脉全血；
样 本 量：弃除初始2ml左右外周血，避免皮肤表皮细胞干扰；再采集5-10ml外周血作为检测样本。

1.CTC检测所需样本类型和样本量？

CTC检测可以实时监测肿瘤的状态，提早预警肿瘤复发或转移、评估治疗疗效，从而帮助患者和医生制定下一步治疗方案，实现肿瘤的个体化治疗。

2.CTC检测有什么临床意义？

不需要，正常饮食对CTC检测无影响，但是尽量早晨空腹或饮食前采血。

3.CTC检测时，取样是否需要空腹？

不同于影像检查的辐射副作用，CTC检测只需要抽取患者血液即可，对患者没有任何副作用。如果有贫血的患者，建议抽血后及时补充营养。

4.CTC检测对患者是否有副作用？

一般情况下，治疗前，建议检测一次；治疗期间，建议每个治疗周期结束后检测一次，评估治疗效果；治疗结束后，建议每三个月检测一次，监测肿瘤状态。CTC 的检测需要重复多次以最大限度达到实时、 动态监测的目的。 CTC 检测可应用于治疗的前、中、后三个阶段。具体检测时间请根据患者的治疗情况制定合理的监测频次与周期。

5.CTC检测多久检测一次？

不是。CTC只有在特定的条件下才会形成转移灶。即CTC数量较大或者CTC数量大幅增加时，肿瘤复发转移的风险较大。若能通过CTC检测实时监控肿瘤的发生发展，就可以帮助医生尽早的采取治疗手段，降低患者肿瘤复发转移的风险。

7.检测到有CTC就表示肿瘤会转移吗？

需要。现阶段CTC检测只能辅助肿瘤检测治疗，不作为肿瘤诊疗的唯一依据。临床仍然需要结合影像学检测和组织活检等常规手段来综合评估和判断患者的病程状态。

6.做了CTC检测是否还需要做其他检测？

第一、若为输液阶段的患者，需要在输液前进行采血；若为评估治疗疗效的患者，建议在治疗前采血，或者治疗后根据临床需求采血。
第二、每个患者的采样管必须标记好样本基本信息，如患者姓名、年龄或床位号等，并且与样本信息登记表对应。
第三、所有血样在使用前都必须置于18-30℃下，切勿冷藏或者冷冻，保证样本的均质性。
第四、使用肝素抗凝CTC采血管的样品室温贮存不得超过6 h，尽量避免分层；使用CTC专用管的样品室温贮存不得超过30 h，尽量避免分层。

8.CTC检测样品采集和贮存有哪些注意事项？

我公司的循环上皮细胞检测试剂盒所使用的血液样本是患者外周血，即上臂肘部外周静脉采血。
首先弃除最初始的 2mL 外周血，因为初始 2mL 外周血中存在皮肤刺破而入血的人皮肤表皮细胞，可能导致产生假阳性。然后再抽取 2mL（或4mL，或7.5mL） 外周血用于CTC 检测。
CTC检测样本采血管与样本贮存要求：医院常用的肝素抗凝、EDTA 抗凝管、ACD管均可用于CTC检测血液样本的采集和贮存，采集后的血液必须室温贮存（18-25℃），切忌置于碎冰之中或置于2-8℃冰箱冷藏，如果短时间内不能及时检测，则需要使用我们特殊的CTC 采血管（长效管），可以保证48h内CTC性能稳定。
针对处于输液阶段的患者，建议在输液前进行采血。针对处于治疗阶段的患者，建议在治疗前采血，或者治疗后根据临床需求采血。运输过程中出现溶血/乳糜状态的血样不适合CTC 检测。血常规异常的血液样本不适合CTC 富集检测。用于CTC 检测的血液样本要明确没有感染性病原体。

9.CytoSorter CTC检测方法对样本有什么特殊要求吗？

我公司 CytoSorter CTC 检测分析技术平台主要有以下特点和优势：
鲱鱼骨结构微流控纳米芯片、链霉亲和素生物素级联放大系统、优化改良的捕获抗体、不断升级的高效微流控富集仪器设备，确保CTC较高捕获效率；
用血量少，最低样本量仅需2mL，更适合肿瘤实时动态监测；
重复性好，稳定性强，灵敏度高；
临床符合率高，适用范围广，更适宜肿瘤临床辅助诊断；
核心专利技术，自主知识产权；
CTC具有细胞活性，为CTC细胞培养、CDX模型构建、体内和体外药敏试验奠定基础；
能够与下游检测技术灵活对接，可以便捷灵活地进行FISH、QPCR 和NGS，为个体化用药提供辅助诊断；
可实现CTC单细胞分离，为单细胞研究和应用分析奠定基础。

11.你们CTC富集检测产品特点与优势有哪些？

CytoSorter CTC 富集检测，从样本处理到荧光显微镜观察，整个实验操作时间大约4个小时。CytoSorter CTC富集仪器上的富集时间仅35-40min，我们一台仪器每天能够处理的样本量是 3-5 个。每个样本荧光显微镜观察的时间可能需要2 个小时左右。
因为样本送检的时间存在一定不确定性，而且每天都有样本检测，所以，我们无法确保当天出具检测结果报告。我们一般给客户或患者承诺五个工作日内出具CTC检测结果报告。

10.你们的CTC 检测实验需要多长时间，当天可以出报告吗？

① 目前文献报道的CTC 分离富集的方法不下50 种，有体内内置捕获（比如德国Gilupi 公司的CellCollector），大部分都是体外分离富集，这些技术根据分类方法的不同，又分为不同的种类，比如阴性去除富集法和阳性捕获富集法，根据CTC 细胞的物理性质的检测方法，根据CTC 的免疫特性的特异性捕获方法等等。总体上来说，目前市场上成型的CTC分离富集产品都是两种，甚至两种以上分离富集方法的结合。
② 目前国内外常用的是磁珠免疫捕获加免疫荧光染色的方法、膜过滤方法来富集检测CTC，磁珠法前期对CTC 的伤害较大，很难获得活的CTC 细胞，捕获效率也相对不高；膜过滤法会漏检体积较小的CTC，细胞形态较差，生化染色不被临床认可。这两种方法的血液用量均是7.5mL 左右。
③ 我公司的微流控芯片免疫捕获加免疫荧光染色法，属于阳性富集（正向富集）特异性免疫捕获检测范畴，我们的优势在于临床符合率高，重复性好，稳定性强，灵敏度高，捕获率高；血液用量比较少，仅需2mL；捕获的CTC 具有细胞活性；可以进行单细胞分离；可以与大多数下游检测技术相结合，用于临床个体化诊断。

12.你们的产品与市场上现有的分离技术相比有什么优势？

肿瘤确诊的金标准是组织病理。CTC检测结果不能作为决策性临床分析依据，须结合患者的影像学、肿瘤标志物、血常规、病理学等检验资料，进行综合分析，由临床医生对患者的状态做综合评估决策。

13.能不能用CTC检测结果确诊肿瘤？

1）CTC是一种泛癌种肿瘤标志物，CTC 的出现早于常规糖蛋白类、酶类等肿瘤标志物，最先进的影像学PET-CT 在发现肿瘤病灶（0.5mm）之前，外周血中已经存在CTC。所以，从理论上来说，CTC 检测是可以用于肿瘤早期筛查，也适合做高端健康体检。
2）微流控纳米芯片是目前最先进的 CTC 富集技术，超高的灵敏度、特异性、稳定性、重复性和准确性，是最适合开展肿瘤早期筛查和健康体检的CTC技术，一些CTC 企业，包括我公司也在积累CTC 辅助肿瘤早期筛查和健康体检大数据。
3）我们公司已经做了 500 多例健康人群CTC 检测，300多例各种肿瘤早期患者、良性疾病患者CTC 检测，数据显示，健康人群、良性疾病患者CTC 数量大多小于2 个，肿瘤患者普遍高于2个CTC。
4）现阶段，我们可以尝试使用我们CTC 富集检测分析技术平台开展CTC 肿瘤早期筛查和健康体检，并给出遗传建议性结果报告，仅供临床参考。
5）CTC可以更前瞻性预测肿瘤发生风险，但CTC检测结果不能单独作为决策性临床分析依据，还需要结合患者的近期影像学、肿瘤标志物、血常规、病理学等检测资料，进行综合分析，由临床医生对患者的状态做综合评估决策。

15.你们的CTC 检测产品是否可以做肿瘤早期筛查？是否可以用于健康体检？

截至目前为止，我们分别在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、食管癌、胆管癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、前列腺癌、膀胱癌、鼻咽癌、下咽癌等头颈肿瘤、骨肉瘤等18种实体肿瘤，将近33个亚类，各类良性疾病和健康人群外周血液样本CTC检测。CTC在各癌肿检出率范围68.8%~ 88.7%，均具有一定的临床诊断价值。
目前我公司主推乳腺癌、肺癌、结直肠癌和肝癌CTC检测临床应用，现阶段这四种肿瘤各种临床应用研究比较成熟，数据比较充分。我们自己在这四种癌症做的临床数据也是最多的，临床价值和意义比较明确。

14.CytoSorter CTC检测产品适用的癌种有哪些？

① 微流控芯片法CTC 富集效率高，捕获的细胞数量相比其他同类技术要多，而且细胞完整性好，具有活性。所以我们可以做细胞培养，做体外或体内药敏试验。
② 在临床上，我们的产品可以和荧光原位杂交（FISH）检测高效结合，大大缩短FISH 检测时间。
③ 同时，我们的微流控芯片富集CTC 可以进行单细胞分离，可以做测序或QPCR或DDPCR，指导个体化用药。

16.CytoSorter CTC检测能不能灵活对接下游检测技术？

① CytoSorter CTC 富集检测平台是目前国内少数可以与下游检测技术灵活对接的CTC 富集检测平台，我们可以很方便的做基于FISH、QPCR、DDPCR和测序等技术的分子/基因检测；
② CTC 既来源于原发灶，又来源于转移灶，其遗传信息完整，与组织具有高度的一致性，已经有大量研究证实在非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌等肿瘤上，CTC 基因检测可以指导个体化靶向用药；
③ CytoSorter CTC 检测已经做了初步验证工作，通过EGFR 基因突变检测辅助吉非替尼、奥西替尼等靶向用药，证实是可行的。但我们的检测结果仅供临床参考，临床还是要以组织的分子病理结果为金标准，根据肿瘤诊疗指南，进行靶向用药指导。
 

17.CytoSorter CTC 检测产品能否做分子/基因检测，是否可以指导靶向用药？

表1  CTC与ctDNA对比

18.现在市面上有针对CTC 的产品和ctDNA 的产品，这两个有什么区别？分别介绍一下相同和不同的地方。

① CTC (Circulating tumor cell,循环肿瘤细胞)是指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。ctDNA（circulating tumor DNA，循环肿瘤DNA）是由肿瘤细胞凋亡碎裂释放到血液循环系统中的DNA 片段。

② 循环肿瘤细胞（CTC）是从肿瘤上脱落的活细胞，可能代表了肿瘤远端转移的种子；循环肿瘤DNA（ctDNA）则是来自肿瘤凋亡细胞的遗传物质，通常以DNA 短片段的形式存在，ctDNA往往含有肿瘤基因突变信息。

③ ctDNA 不仅仅是指标，似乎还与“肿瘤负荷”有关，其水平随疾病严重程度而升高。此外，一些早期的癌症也能检测到ctDNA，表明不仅可使用ctDNA 来监控现有的癌症，还能作为筛查工具。ctDNA 作为筛查工具，也面临一些潜在的问题。目前还不清楚ctDNA 在不同的癌症类型、分期和患者中的普遍程度。即使检测到ctDNA，也不清楚是体内哪里产生的，或者即使检测到的突变与肿瘤存在一定关联，也需要后续检测。

④ CTC 分析使用的是基因组完整的细胞，可以进行细胞形态显微观察，可以研究每个细胞的基因组、转录组、表观组和蛋白组等，CTC 分析可以获得比ctDNA 分析更全面更丰富的遗传信息。

⑤ 不过，对于液体活检而言，问题并不在于选择CTC 还是ctDNA。两种标志物能提供互补的信息，作为临床工具都有市场。“肿瘤医生以及监管部门对液体活检的概念了解得越多，对每个人都是双赢的--对患者、对医生以及对制度本身，因为这将使得发病率更低、并发症更少，并改变早期治疗，对患者有利。”

PET-CT 是最高档PET 扫描仪和先进螺旋CT 设备功能的一体化完美融合，临床主要应用于肿瘤、脑和心脏等领域重大疾病的早期发现和诊断。PET 提供病灶详尽的功能与代谢等分子信息，而CT 提供病灶的精确解剖定位，一次显像可获得全身各方位的断层图像，具有灵敏、准确、特异及定位精确等特点，可一目了然的了解全身整体状况，达到早期发现病灶和诊断疾病的目的。目前国内PET-CT 检测费用为7500-10000 元，PET-CT 检测前，需要先吞服具有放射性的显影剂，对人体有一定的伤害，而且每年只能检测一次，缺乏实时动态监测功能。
相对于 PET-CT 来说，CTC 检测更加机动灵活，虽然不能像PET-CT 一样能够直观体现肿瘤位置、大小，但它可以从微观体现肿瘤的发生发展变化，还可以指导个体化用药。可以说，CTC 检测与PET-CT 检测，一个是微观层次，一个是宏观层次，各有优势，均是肿瘤诊疗不可或缺的手段和方法。

19.CTC 与PET-CT 的对比，有哪些优势？

虽然肿瘤标志物价位比较便宜，但是其灵敏度，以及特异性均不高，而且肿瘤标志物往往容易受患者的生理状态影响，产生假阳性或假阴性，另外，往往肿瘤标志物也只能对相应肿瘤标志物鉴定的癌种进行诊断，而该肿瘤标志物正常并不能排除患者不患有其他癌症，而CTC 作为一种广谱的肿瘤筛查与辅助诊断标志物，可以对于多种高发实体肿瘤是否发生进行风险预测。

表3  肿瘤诊断方法对比

20.CTC 与肿瘤标志物对比，有哪些优势？

1）实验空间环境
CytoSorter CTC检测项目开展对实验环境要求不高，一般开放环境即可。必须具有荧光显微镜结果观察暗室。
2）仪器设备配置
除了CytoSorter 循环肿瘤细胞分析仪外，还需要倒置荧光显微镜、冷冻梯度离心机（至少3000rpm）、常温梯度离心机（至少3000rpm）、不同规格微量移液器（0.1-10ul 、0.5-20ul 、20-200ul 、100-1000ul）。
3）实验设施：
仪器实验台：常规试验台或同等规格的实验桌，可摆放CTC检测仪器[ 565.06mm(h) x 340.8mm(d) x 271.8mm(w) ]和笔记本电脑（30cm*19cm），即仪器放置和运行实验台的长度需要120cm左右，宽度需要75cm左右。
配液操作台：CTC检测试剂配液和反应的实验台尽量长度在150cm左右，宽度75cm左右，最好具有可供单人或双人操作使用的生物安全柜。
实验坐椅：2-3把坐椅。
生物垃圾桶/生物垃圾袋：用于Tips、手套、吸水纸、废液、废弃采血管、废弃离心管等的贮存。
4）电器设施：
仪器运行实验台附近至少具有一个常规3孔插座（仪器工作电压：220v）。
配液操作台附近具有一个常规两孔插座，用来运行Mini离心机。
-20℃低温冰箱和2~8℃冷藏箱，具有冷冻冰袋空间和贮藏试剂空间。
5）辅助检测用品：科室尽量具有盖玻片（24*60mm）、封片胶、甘油等，防止正置荧光显微镜需要剥离PDMS膜来观察结果。

22.CytoSorter CTC富集检测项目开展，需要具备哪些实验条件？

1）必须使用有产品批准文号，并经国家药品/生物制品检定机构检定合格的体外诊断试剂，以及合格的一次性采血器材，不得重复使用一次性采血器材。
2）血液检测实验室负责人能有效地组织和实施血液检测业务工作，并对血液检测过程、检测结果负责。
3）实验室应当定期对工作人员进行培训，考核其掌握实验室最新血液检测技术规范、操作规程以及生物安全防护知识和实际操作技能，并进行考核，经考核合格者，方可上岗。
4）根据血液检测流程和检测项目分设检测作业区，包括样本接收、处理和贮存区，试剂贮存区等，不同类型检测项目作业区。其他特殊区域的布局应符合相应的要求。
在有血液或其他可能具有传染性接触的工作场所禁止进食、喝水、吸烟、使用化妆品或唇膏及佩戴隐形眼镜。
5）血液检测实验室有限入措施，符合所有进入条件的人方可进入工作场所和实验室。应在通道上贴上书面声明和程序以使符合进入条件的人了解到可能存在的生物危险。
6）所有涉及血液或其他可能具有传染性的血液样本的操作程序应以尽可能减少发生飞溅、喷洒或成滴可能性的方式进行，并做好个人生物安全防护。
7）应建立和保持完整的血液检测相关记录。记录的种类至少包括标本登记、保存、销毁记录，试剂管理，质量控制记录，设备运行维护和校验记录，实验室安全记录，医疗废弃物处理记录等。
8）所有废弃的血液样本或采血器材应置于专用的和有标记的用于处置危险废弃物的容器内并安全运出实验室。
9）实验工作完毕，将个人防护装备放在指定位置，并进行洗涤、消毒处理。

21.如果在病理科开展CTC检测项目，血液样本该如何处理，确保生物安全？