干货| CTC PD-L1检测在临床上的应用（上）

近10年来，免疫疗法作为一种新兴的癌症治疗手段，为许多晚期癌症患者带来了生命的曙光。目前，使用最广泛的方法是使用针对抑制 T 细胞活化的调节性免疫检查点分子的靶向单克隆抗体，其中以阻断程序性死亡蛋白 1 和阻断程序性死亡配体蛋白 1（PD-1/PD-L1）的药物为主要代表。PD-1 抑制剂于 2014 年在美国首次获批，于 2018 年在我国获批使用。目前，影响免疫检查点抑制剂的有效生物标志物 包括：PD-L1，MSI / dMMR，TMB，TIL等，更多反映免疫疗效的生物标志物还在不断的研究与试验中，但就目前而言， PD-L1 的表达率仍是最主要的判定指标。

目前临床上主要还是应用组织PD-L1 检测来辅助免疫药物治疗，但组织PD-L1 检测存在着许多问题，比如，（1）检测技术方面。比如不同PD-1 /PD-L1 抑制剂都有对应的 PD-L1 检测方法，但是每种检测所用到的抗体和技术都不同，导致 PD-L1 表达水平的设定不同，同时对于不同的瘤种 PD-L1 表达水平的设定也不同。这对于结果判读是一个很大的问题和挑战。（2）生物学方面。如肿瘤内和肿瘤间异质性。（3）组织来源方面。如细胞学标本、存档标本与新鲜标本、原发部位与转移灶等。（4）PD-L1 表达具有动态变化的特点，随时间和治疗应答而波动、上调或下调，有些晚期无法取组织的患者就没有办法判断PD-L1表达状态，从而选择治疗方式。

那么，临床上急需阳性率更高，更便捷的PD-L1 检测手段，来辅助免疫治疗，比如CTC PD-L1蛋白表达水平的检测，能够很好地解决组织PD-L1遇到的难题，不局限于组织取样，同时能够实现多次无创取样，辅助免疫治疗药物伴随诊断，不仅免疫治疗，同样也可以作为肿瘤标志物辅助手术、放（化）疗及新辅助化疗的预后评估、疗效监测和疾病进展监测！

下面让我们看几篇文献，进一步了解CTC PD-L1检测在临床上的应用。

Khattak MA等人[1]为评估循环肿瘤细胞（CTC）上 PD-L1 的表达是否可以作为 PD-1 抑制剂 pembrolizumab 治疗的临床效益和疗效的预测性生物标志物。对接受 pembrolizumab 治疗的转移性黑色素瘤40例患者在治疗前及治疗后 6-12 周采集血样。采用多参数流式细胞仪检测 CTCs 并评估 PD-L1 的表达。

结果发现，40例患者中有25例(63%)检出CTC。可检测到PD-L1+CTC的患者(14/25，64%)，PD-L1+CTC与PD-L1−CTC组12个月的PFS率分别为81%和22%(p=0.012)，PD-L1+CTC与PD-L1−CTC组24个月的OS同样存在差异（图1）。

图1

多元线性回归分析证实PD-L1+CTC是PFS的独立预测生物标志物(危险比，0.229；95%可信区间，0.052-1.012；p=.026)（表1）。

在基线和治疗开始 6-12 周后的 CTC 检测结果的比较显示，在大多数应答者中，CTC 的总数以及表达 PD-L1 的 CTC 的比例在治疗后下降；而在大多数无应答者中，CTC 总数和 CTC PD-L1 比例增加或保持不变（图2）。

图2

研究表明，CTC PD-L1 是晚期黑色素瘤患者 PFS 的独立预测生物标志物。CTC PD-L1 的表达可预测患者对帕博利珠单抗治疗的效果。当表达 PD-L1  CTC≥1时，患者对帕博利珠单抗治疗的应答率更高，且无进展生存期更长。

Liu M等人[2]为评估程序性死亡配体1(PD-L1)阳性CTCs在胃癌（GC）患者中的预测和预后价值，从70例GC患者(38例可切除，32例不能切除)外周血标本中分离出CTC。通过免疫荧光和免疫组织化学方法在局部晚期胃癌原发灶组织标本和转移淋巴结样本中观察到 PD-L1 和 CSV 的共表达情况。

结果发现，70例胃癌患者中有50例(71%)检测到CSV+PD-L1+CTCs。晚期胃癌患者基线 CSV+PD-L1+CTC 数量比早期患者多。疾病进展患者的 CSV+PD-L1+CTC 比疾病稳定的患者多，CSV-CTC与PD-L1表达呈正相关（图3）。

图3

CSV+CTC 较多的患者有较差的 OS 和 PFS。CSV+PD-L1+CTC 较多的患者也有较差的 OS 和 PFS（图4）。

图4

CTC  PD-L1临床应用方向主要有预后评估、疗效评估、疗效监测、受益人群筛选等，而且CTC  PD-L1检测不仅可以应用于免疫药物治疗，也可以作为肿标用于放化疗、手术等。CTC PD-L1检测的临床应用价值不可估量！

（待续未完）

参考文献：

[1] Khattak MA, Reid A, Freeman J, et al. PD-L1 Expression on Circulating Tumor Cells May Be Predictive of Response to Pembrolizumab in Advanced Melanoma: Results from a Pilot Study. Oncologist. 2020;25(3):e520-e527.

[2] Liu M, Wang R, Sun X, et al. Prognostic significance of PD-L1 expression on cell-surface vimentin-positive circulating tumor cells in gastric cancer patients. Mol Oncol. 2020;14(4):865-881.

1.采用目前最先进的鲱鱼骨结构纳米微流控芯片专利技术，全自动化CTC扫描检测。

2. 采用EpCAM和CSV双抗体捕获，PanCK、CSV和PD-L1三种抗体检测，同时实现各种CTC特异性分型捕获计数及CTC PD-L1的检测。

3. 可用于辅助免疫治疗药物伴随诊断，免疫治疗、手术、放（化）疗及新辅助化疗的预后评估、疗效监测和疾病进展监测。

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